implanty bydgoszcz forum

W poprzednim badaniu z tego laboratorium wykazano, że wiązanie GAS z ludzkimi keratynocytami in vitro odbywało się za pośrednictwem wiązania polisacharydu otoczkowego kwasu hialuronowego do CD44 na błonie komórkowej keratynocytów (10). W niniejszej pracy staraliśmy się jeszcze bardziej podkreślić znaczenie interakcji GAS z CD44 w kolonizacji gardła in vivo. W przeciwieństwie do przyłączania GAS do hodowanych keratynocytów in vitro, na interakcję wiązania in vivo mogą mieć wpływ takie czynniki, jak obniżona ekspresja CD44 w całkowicie zróżnicowanym nabłonku, interferencja przez warstwę śluzową pokrywającą gardło lub zmiany w ekspresji bakterii. cząsteczki powierzchniowe indukowane przez środowisko hosta. Aby ustalić, czy model mysi byłby odpowiedni do tego badania, przeprowadziliśmy wstępne eksperymenty, aby ustalić, że przywiązanie GAS do pierwotnie hodowanych mysich keratynocytów, podobnie jak do ludzkich keratynocytów, było mediowane przez wiązanie polisacharydu otoczkowego GAS z CD44. Aby zbadać rolę CD44 w wiązaniu GAS z mysimi keratynocytami, ustalono pierwotne hodowle komórek izolowanych z nowonarodzonej skóry myszy C57BL / 6. Badano dwa szczepy GAS: B514-Sm, szczep M-type 50, który, jak wykazano, skutecznie kolonizuje górne drogi oddechowe myszy po inokulacji donosowej, i 950771, izolat M-type 3 pierwotnie hodowany od pacjenta z martwiczym zapaleniem powięzi i typowe dla szczepów, które powodują ludzkie zapalenie gardła i inwazyjne zakażenie. mAb KM81 skierowane na miejsce wiązania kwasu hialuronowego mysiego CD44 (28) zahamowane przez ponad 75% wiązanie dzikich (tj. zakapsułkowanych) szczepów G5 B514-Sm i 950771 z mysimi keratynocytami (P <0,005 dla obu szczepów GAS porównywanych z wiązaniem w obecności nieistotnego przeciwciała kontrolnego lub w nieobecności mAb; Figura 1). mAb KM81 nie miało znaczącego wpływu na wiązanie szczepu 188, izogenicznego acapsular mutanta szczepu 950771 pochodzącego ze szczepu GAS typu dzikiego przez inaktywację genu syntazy hialuronianu, ma A. Całkowite przyleganie szczepu z niedoborem kapsułek było równe lub większe niż szczepu dzikiego typu kapsułkowanego, ale było pośredniczone przez interakcje wiązania niezależne od CD44. Wyniki te są zgodne z wcześniejszymi badaniami, które wykazały, że kapsułka kwasu hialuronowego maskuje alternatywne adhezyny na powierzchni bakterii i zapobiega wiązaniu GAS z białkiem M do ludzkich komórek nabłonka (10, 13). Figura Hamowanie przyłączania GAS do normalnych mysich keratynocytów przez mAb do CD44. Dane reprezentują średnią. SD adherentnych bakterii odzyskanych po inokulacji keratynocytów GAS w obecności KM81 mAb anty-CD44 (kreskowane kreski), nieistotne kontrolne mAb 4H1 (otwarte słupki) lub bez przeciwciała (wypełnione słupki). Traktowanie KM81, ale nie kontrolnym mAb, hamowało przyłączanie szczepów G5 typu dzikiego (kapsułkowanych) B514-Sm i 950771 (a). KM81 nie miało znaczącego wpływu na wiązanie zmutowanego szczepu 188 (b). Kapsułkowany GAS słabo przyczepia się do keratynocytów pozbawionych CD44 z myszy transgenicznych. Użyliśmy transgenicznych myszy z niedoborem CD44, aby określić, czy selektywna utrata ekspresji CD44 przez keratynocyty wpłynęła na wiązanie GAS z keratynocytami in vitro i kolonizację gardła in vitro in vitro. Myszy K5-CD44 eksprymują transsensowny antysensowny CD44 pod kontrolą promotora keratyny-5, który celuje w ekspresję transgenu antysensownego do przedziału komórek podstawnych rozwarstwionego nabłonka łuskowego (25). Wysoki poziom ekspresji transgenu powoduje całkowitą utratę ekspresji CD44 we wszystkich warstwach naskórka. Transgeniczne zwierzęta badano przesiewowo pod kątem wysokiego poziomu ekspresji antysensownego transgenu za pomocą mikroskopii immunofluorescencyjnej pierwotnie hodowanych keratynocytów przy użyciu mAb KM81. [przypisy: jak szybko obniżyć ciśnienie, jarmuż właściwości, kłykciny kończyste leczenie ]