krasińskiego przychodnia wrocław

Celem jest zbadanie ekspresji SEMA3F przez ISH w tych próbkach. Podsumowując, SEMA3F jest silnym inhibitorem przerzutów. Może działać poprzez różne mechanizmy, w tym bezpośrednie hamowanie agresywnej migracji komórek nowotworowych, adhezji i inwazyjności; promocja enkapsulacji, prowadząca do łagodnego fenotypu; i hamowanie angiogenezy nowotworu przez chemorepulsację EC. Metody Kultura komórkowa. Linie komórkowe o niskim i wysokim potencjale przerzutowym, odpowiednio, obejmowały komórki czerniaka ludzkiego (A375P i SM) (54) i ludzkie linie komórek przejściowych (pęcherz) (253J i 253JBV) (55) dostarczone przez Isaiah J. Fidler (Anderson Cancer Center) , Houston, Texas, USA); ludzkie komórki raka gruczołu krokowego (PC3M i PC3MLN4) (56) dostarczone przez Curtis Pettaway (Anderson Cancer Center); i szczurze komórki raka gruczołu krokowego (AT2.1 i AT6.1) (57) dostarczone przez Bruce a Zettera (Children s Hospital, Boston, Massachusetts, USA). Komórki PAE dostarczyła Lena Claesson-Welsh (Uppsala University, Uppsala, Szwecja). Komórki PAP NRP1 opisano wcześniej (2). HPAEC i HUVEC zakupiono od Cambrex Bio Science Walkersville Inc. Human LECs. Świeżo wycięte ludzkie napletki sterylizowano w betadynie, mielono i trawiono kolagenazą typu IA-S (400 U / ml; Sigma-Aldrich). Po inkubacji enzym zobojętniono 10% dezaktywowanym termicznie FCS (HyClone) w DMEM (Invitrogen Corp.), fragmenty napletka pozostawiono do opadnięcia i usunięto supernatant z koktajlu. Teflonowy tłuczek (DuPont) zastosowano do wytłaczania komórek z trawionych fragmentów tkanek. Homogenat został odcedzony (100 .m), odwirowany i ponownie zawieszony w PBS / 0,1% BSA. Komórki selekcjonowano za pomocą kulek magnetycznych pokrytych przeciwciałem przeciw ludzkiemu VEGFR-3, zgodnie z instrukcjami producenta (Dynal Biotech) i umieszczano na płytkach pokrytych 1,5% żelatyną w podstawowej pożywce śródbłonkowej (EBM-2; Cambrex Bio Science Walkersville Inc.), 20% ludzkiej surowicy (Irvine Scientific), 30% mięsaka 180-kondycjonowanego podłoża, 10 ng / ml FGF-2 (hojny prezent od Scios Inc.) i 10 .g / ml heparyny (Sigma-Aldrich) . Dzień po wysianiu, kolonie o wielkości 3. 10 EC wyizolowano z cylindrami do klonowania (Sigma-Aldrich) i ekspandowano. LEC zostały potwierdzone przy użyciu FACS z przeciwciałami specyficznymi względem limfatycznego (58). Myszy. Samce myszy pozbawionych patogenów zakupiono od Charles River Laboratories Inc. i stosowano, gdy miały 8. 10 tygodni życia. Myszy utrzymywano w warunkach wolnych od patogenów w ośrodku akredytowanym przez Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC). Opieka i procedury eksperymentalne były zgodne z obowiązującymi przepisami Departamentu Rolnictwa Stanów Zjednoczonych, Departamentu Zdrowia i Opieki Społecznej oraz NIH, a także Komitetu ds. Instytucjonalnych opieki nad zwierzętami i korzystania z nich w szpitalu dziecięcym. Zaszczepienie komórek nowotworowych. Komórki SM były wolne od mykoplazmy, reowirusa typu 3, wirusa zapalenia płuc myszy, adenowirusów myszy, wirusa mysiego zapalenia wątroby, limfocytowego wirusa zapalenia opon mózgowych, wirusa ektromelii i wirusa dehydrogenazy mleczanowej (Microbiological Associates). Komórki guza (106 komórek na 100 ul HBSS) wstrzyknięto podskórnie (59) do prawego grzbietowo-bocznego boku nagich myszy. W protokole myszy uśmiercono 6 tygodni po inokulacji komórek nowotworowych. W protokole 2 guzy pierwotne usunięto chirurgicznie, gdy wielkość guza osiągnęła średnią średnicę cm (4-5 tygodni po wstrzyknięciu). Następnie myszy zabito 12 tygodni po wstrzyknięciu komórek nowotworowych. W przypadku eksperymentalnych przerzutów myszom wstrzyknięto dożylnie 2 x 105 komórek na 100 ul HBSS, a płuca badano 12 tygodni później. Transfekcja. Pełnej długości, oznaczony myc, ludzki konstrukt SEMA3F w wektorze pSecTag (Invitrogen Corp.) dostarczył Marc Tessier-Lavigne (UCSF, San Francisco, Kalifornia, USA) Komórki transfekowano LipofectAMINE 2000 (Invitrogen Corp.) zgodnie z instrukcjami producenta. Wytworzono pewną liczbę stabilnych linii, w tym klony A2, A3, B2, C3 i D1, które eksprymują SEMA3F, klon H10, który był transfekowany, ale nie wykazuje ekspresji SEMA3F, i pozorowane komórki, które transfekowano pustym wektorem pSecTag. Pełnej długości ludzki konstrukt NRP2 w wektorze pcDNA 3.1 (+) (Invitrogen Corp.) dostarczył Seiji Takashima (Osaka University Graduate School of Medicine, Osaka, Japonia). Komórki PAE były trwale transfekowane ludzkim NRP2, a ekspresję potwierdzono za pomocą analizy Western blot. Przeciwciała do analizy Western blot. MAb anty-C-Myc 9E10, anty-ludzkie NRP2 C9 mAb i królicze anty-ludzkie NRP1 H286 zakupiono z Santa Cruz Biotechnology Inc. Anty-ludzkie mAb 1B 2251, antyludzkie mAb AUC 5. 1950 i królika. przeciwciało poliklonalne 1949 anty-A5 zakupiono od Chemicon Internati
[przypisy: klasterowe bóle głowy, kłykciny kończyste objawy, kłykciny kończyste leczenie ]