lekarze androlodzy poznań

(A i B) Myszy RIP-LCMV-NP i RIP-LCMV-NP x Kb (a) infekowano 105 PFU LCMV lub PV. Po 4 tygodniach myszy otrzymały wtórną infekcję LCMV lub PV. (A) Wewnątrzkomórkowe barwienie cytokin (ICCS) po stymulacji PV-NP205 jest wyświetlane dla reprezentatywnej myszy zainfekowanej najpierw LCMV (tylko LCMV), a następnie PV (LCMV-PV) (średnie częstotliwości są wskazane w obszarach pudełkowych). (B) Częstotliwość komórek T CD8 swoistych dla epitopu we krwi została określona przez ICCS dla IFN-y. po stymulacji wskazanymi peptydami (klucz) bezpośrednio przed (górny panel) i 7 dni po (dolny panel) wtórnym zakażeniu. (C) Liczba limfocytów specyficznych dla PV-NP205a ograniczonych H-2Kb. Po zakażeniu LCMV lub PV, ocenianych przez ICCS dla IFN-y. Splenocyty zebrano w dniu 35 od myszy, które otrzymały LCMV w dniu 0 (d0), a dla grupy PV PV w dniu 28 (d28). Wyświetlane są środki (. SEM). (D) Prekursory lityczne po LCMV-NP396 względem stymulacji antygenowej PV-NP205 przez 10 dni. Oprócz aktywności litycznej, IFN-y produkcję oceniano w supernatancie każdej studzienki; studnie z IFN-y poziomy ponad 0,05 ng / ml metodą ELISA zostały policzone jako dodatnie. IFN-. produkcja wynosiła średnio 13 (~ 3,5) ng / ml w hodowlach stymulowanych LCMV-NP3963 i 7,1 (~ 3,1) ng / ml w hodowlach stymulowanych PV-NP205 .. Ten eksperyment powtórzono trzy razy i pokazano wartości średnie (. SEM). * P <0,05. Następnie zbadaliśmy, czy ekspansja / aktywacja uprzednio zagruntowanych populacji limfocytów T CD8 specyficznych wobec LCMV / PV-NP205a przez epitop naśladujący ekspresję PV, poprawiła funkcje efektorowe tych komórek. Pierwotna infekcja myszy C57BL / 6 typu dzikiego lub myszy RIP-LCMV-NP z PV indukowało brak wykrywalnych odpowiedzi limfocytów T CD8 na całe białko LCMV-NP (Tabela 2). Jednakże, eksprymowane przez PV, myszy z ekspresją LCMV dawały wyraźnie wykrywalne odpowiedzi przypominające dla całego LCMV-NP, o czym świadczą testy zabijania (tabela 2) i LCMV-NP205, jak pokazano przez wewnątrzkomórkowe barwienie cytokin dla IFN-y. metodą cytometrii przepływowej (Figura 2C). W zgodzie z wynikami przedstawionymi na Figurze 2C jest znacząco zwiększona liczba prekursorów CTL PV-NP205 u myszy, które kolejno otrzymały LCMV, a następnie PV (Figura 2D). Tak więc, ekspansja krzyżowo reaktywnych populacji limfocytów T CD8 LCMV / PV-NP205 z lityczną aktywnością (31) i IFN-a produkcja następuje po infekcji PV tylko u myszy odpornych na LCMV. Tabela 2 Toksyczne komórki T specyficzne dla LCMV-NP znaleziono w myszach LCMV, odpornych, ale nie naiwnych po infekcji PV Sekwencyjne zakażenie LCMV i PV skutkuje akumulacją specyficznych dla PV-NP205 a komórek T CD8 w wysepkach. Badanie histologiczne trzustki w tygodniu 3 po wtórnym zakażeniu myszy RIP-LCMV-DP z ekspresją LCMV z PV wykazało zwiększoną infiltrację limfocytów i zniszczenie wysepek Langerhansa (Figura 3A, dolny lewy panel). Występowała głęboka różnica w naciekaniu wysepek przez limfocyty T CD8 u tych myszy w porównaniu z myszami, którym podano tylko pojedynczą infekcję LCMV (Figura 3A, górny lewy panel). Figura 3. Sejfatywne zakażenie LCMV i PV skutkuje akumulacją specyficznych dla PV-NP205 a komórek T CD8 w wysepkach Langerhansa. (A) myszy RIP-NP zakażono 105 PFU LCMV. Po 4 tygodniach jedna grupa myszy otrzymała wtórną infekcję PV (105 PFU, ip). Lewe panele, trzustki zebrano w tygodniu 3 po wtórnej infekcji i 6- (3-m tkankowe skrawki wybarwiono pod kątem infiltracji komórkowej monoklonalnym przeciwciałem przeciwko CD8. Skrawki wybarwiono kontrastowo hematoksyliną. Prawe panele, trzustki zebrano w dniu 5 po wtórnej infekcji i wycięto 6- (3-cio tkankowe wycinki i zabarwiono je na komórki T CD8 za pomocą skoniugowanej z rhodaminą Xp anty-CD8 (czerwony) i specyficznych dla PV-NP205 (3 komórek T CD8 z sprzężone allofikocyjaniny tetramery H-2Kb-PV-NP205 (zielone) [przypisy: olx zakopane, kalprotektyna, kłykciny kończyste leczenie ]