marek sternalski częstochowa

Barwienie tetramerem zawierającym nieistotny peptyd stosowano jako kontrolę negatywną. Po całonocnej inkubacji w temperaturze 4 ° C skrawki przemyto w PBS i następnie utrwalano przez 30 minut w temperaturze pokojowej buforem PBS 2% formaldehydem. Skrawki ponownie płukano w PBS i inkubowano przez 3 godziny w 4 ° C z poliklonalną króliczą anty-fikoerytryną rozcieńczoną 1: 2500 w PBS z 2% NGS. Następnie, skrawki przemywano i inkubowano przez 3 godziny w temperaturze 4 ° C z kozim anty-króliczym skoniugowanym z kozą antybiotykiem sprzężonym z FITC sprzężonym z FITC kozim anty-szczurzym skoniugowanym z kozim anty-króliczym, skoniugowanym z FITC 1: 1000 w PBS z 2% NGS. Rhodaminowe czerwone X-dodatnie i FITC-dodatnie limfocyty T analizowano za pomocą mikroskopu konfokalnego (40). Tolerancja EDCI. Splenocyty izolowano od myszy C57BL / 6 i inkubowano przez godzinę na lodzie w stężeniu 3,2 x 108 komórek / ml z mg peptydu NP205 w obecności 30 mg / ml EDCI (Sigma-Aldrich) (43,44). Usieciowane splenocyty przemyto i 2 x 107 komórek wstrzyknięto retro-orbitalnie myszom biorcom. Pierwotne zakażenie 105 PFU LCMV-Arm nastąpiło w dniu 5 po adopcyjnym przeniesieniu. W 4. tygodniu po zakażeniu LCMV myszy otrzymały wtórną infekcję 105 PFU PV. Leczenie poli (I: C). Myszy zakażono 105 PFU LCMV. W 4. tygodniu po zakażeniu myszy otrzymały pojedynczą dawkę (ip) 100 .g peptydu NP205 lub peptydu OVA kontrolującego wiązanie H-2Kb (SIINFEKL). W tym samym czasie myszy otrzymały 7,5 .g / g masy ciała syntetycznego dwuniciowego RNA naśladującego RNA (I: C). Podziękowania Jest to Publikacja 625 Wydziału Immunologii Rozwojowej, La Jolla Institute for Allergy and Immunology. MG von Herrath był wspierany przez NIH udziela AI44451, DK51091 i AI51973. U. Christen był odbiorcą stypendium Juvenile Diabetes Research Foundation i nagrodą za rozwój kariery przez American Liver Foundation. KH Edelmann był wspierany przez grant szkoleniowy NIH NS041219. MBA Oldstone był wspierany przez granty NIH DK58541 i AI09484. Dziękujemy Michael J. Buchmeier (The Scripps Research Institute, La Jolla, Kalifornia, USA) za dostarczenie nam teledysku. Jesteśmy wdzięczni J. Lindseyowi Whittonowi (Instytut Naukowy Scrippsa, La Jolla, Kalifornia, USA) i Howardowi M. Greyowi (Instytut La Jolla w Alergii i Immunologii, San Diego, Kalifornia, USA) za krytyczny przegląd naszego rękopisu, a my dziękuję Diana Frye za pomoc przy rękopisie. Przypisy Urs Christen i Kurt H. Edelmann w równym stopniu przyczynili się do tej pracy. Zastosowano niestandardowe skróty: EDCI, 1-etylo-3- (3-dimetyloaminopropylo) -karbodiimid; GP, glikoproteina; HSK, opryszczkowe zrogowacenie rogówki; HSV-1, mysi herpeswirus 1; Kb (.), Niedobór H-2Kb; Kb (+), H-2Kb-dostateczne; LCMV, wirus limfocytowego zapalenia opon mózgowych; Ramię LCMV, szczep LCMV Armstrong; LCMV-Arm-Var, wariant ewakuacyjny LCMV-Arm; LCMV-Past, szczep LCMV Pasteur; NGS, normalna surowica koziego; NP, nukleoproteina; PDLN, węchowy węzeł chłonny drenujący; poli (I: C), kwas polioksyny-policytylowy; PV, wirus Pichinde; RIP, promotor insuliny szczurzej; T1D, cukrzyca typu 1; TMEV, Theiler mysi wirus zapalenia mózgu i rdzenia. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów.
[patrz też: kłykciny kończyste objawy, jarmuż właściwości, kalorie banan ]