Czerniak jest najbardziej śmiertelnym rakiem skóry. Większość zgonów z powodu czerniaka wynika z przerzutów. Pokazano, że semaforyny hamują migrację komórek nerwowych i śródbłonkowych, ale nie udokumentowano wpływu semaforin na przerzuty nowotworowe. Stwierdziliśmy, że semaforyna 3F (SEMA3F) była znacząco obniżona w wysoce przerzutowych ludzkich liniach komórkowych in vitro i in vivo, co sugerowało, że może on być inhibitorem przerzutów. Przerzutowe komórki czerniaka ludzkiego transfekowano SEMA3F i wszczepiono myszom; powstałe guzy nie...
Dodatkowe analizy danych przeprowadzono przy użyciu pakietów oprogramowania SigmaPlot 2000 (SPSS Science, Chicago, Illinois, USA) i Origin 6.0 (Microcal Software Inc., Northampton, Massachusetts, USA). Prądy z całych komórek były filtrowane przy częstotliwości 2 kHz i uzyskiwane przy 5 kHz. Roztwór kąpielowy zawierał (w mM): 140 NaCl, 4.0 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 5 HEPES i 10 glukozy, pH 7,4, ~ 280 mosmol / kg. Roztwór pipetowy zawierał (w mM): 130 NaCl, 2,0 MgCl2, 5 HEPES i 5 EGTA, pH 7,4, a 270 mosmol / kg. Roztwór pipety rozcieńczono 7.
Jedna klatka filmu wideo (około 6 godzin) jest wyświetlana przy większym powiększeniu (rysunek 7N, prawy panel), aby wskazać liczne rozszerzenia EC lub filopodia (czarne strzałki) obecne podczas procesu odsunięcia. SEMA3F odpycha komórki PAE NRP2 i komórki HUVEC (Figura 8, A i E). Aby określić, czy indukowana przez SEMA3F odpychanie była zależna od NRP2, użyliśmy RNAi do wyciszenia NRP2. Analiza Western blot i immunocytochemia pokazują, że RNAi NRP2 silnie zmniejsza poziomy białka NRP2 w komórkach PAE NRP2 (Figura 8, B i D) i w komórkach HUVEC ...
