ortopeda pakosz kielce

Barwienie immunohistochemiczne nabłonka gardła obserwuje się w przypadku mAb do CD44, ale nie w przypadku nieistotnego mAb kontrolnego. Etykiety wskazują miejsce nabłonka (E), prześwitu (L) i podśluzówki (S). (b) Lewa kolumna pokazuje poziom ekspresji CD44 w nabłonku gardła myszy antysensownych typu dzikiego i K5-CD44. Sekcje histologiczne oceniano pod kątem ekspresji CD44 w nabłonku gardła przez trzech niezależnych obserwatorów, nie znając wyników hodowli w gardle. Ekspresja CD44 była oceniana w skali od (tło) do 4 (odpowiednik kontroli typu dzikiego). Z prawej strony wyniki hodowli gardła dla GAS w każdym z 5 dni po inokulacji donosowej za pomocą GAS B514-Sm. (c) Podsumowanie wyników hodowli w gardle przedstawione w b. Dane przedstawiają odsetek myszy z dodatnią hodowlą gardła każdego dnia po inokulacji donosowej u myszy typu dzikiego (wypełnione słupki), myszy transgenicznych z poziomami CD44 typu dzikiego na keratynocytach (kreskowane kreski) i myszy transgeniczne o zmniejszonej lub nieobecności Ekspresja CD44 na keratynocytach (otwarte słupki). Blokowanie wiązania GAS z CD44 zapobiega kolonizacji gardła przez GAS u myszy typu dzikiego. Eksperymenty z transgenicznymi myszami opisanymi tutaj wskazywały, że gardłowa ekspresja CD44 spowodowała zwiększoną kolonizację za pomocą GAS. Jako alternatywny sposób scharakteryzowania roli CD44 jako receptora GAS, badaliśmy wpływ zaburzania interakcji między kapsułką GAS a CD44 u myszy typu dzikiego. W tych badaniach myszy typu dzikiego inokulowano donosowo szczepem B514-Sm GAS zmieszanym z mAb z CD44 lub nieistotnym kontrolnym mAb skierowanym na lipopolisacharyd P. aeruginosa. Donosowe podawanie KM81 mA81, razem z prowokacją GAS, zmniejszyło kolonizację o około 60% w każdym z 3 dni po inokulacji w porównaniu z jednoczesnym podawaniem przeciwciała kontrolnego z inokulum bakteryjnym (P <0,0001; Figura 4). Tak więc, przeciwciało specyficzne dla domeny wiążącej hialuronian receptora CD44 blokowało nie tylko przywiązanie GAS do komórek nabłonka in vitro, ale także kolonizację gardła przez GAS in vivo. Figura 4 Zapobieganie kolonizacji przez gardło GAS in vivo przez mAb anty-CD44. Dane przedstawiają frakcję myszy z dodatnimi hodowlami gardła dla GAS w każdym z 3 dni po inokulacji donosowej za pomocą GAS podawanej albo z mAb do CD44, albo z nieistotnym kontrolnym mAb (n = 20 myszy na grupę). Egzogenny kwas hialuronowy blokuje wiązanie GAS z mysimi keratynocytami. Aby zbadać specyficzność interakcji między kapsułką GAS a CD44 na komórkach nabłonka, przetestowaliśmy, czy egzogenny kwas hialuronowy może konkurować z GAS o wiązanie z mysimi keratynocytami. Dodanie egzogennego kwasu hialuronowego zahamowało przyłączenie GAS do mysiej linii komórkowej keratynocytów PAM2.12 o więcej niż 95% (P <0,03; Figura 5). Kolejny kwasowy polisacharyd o wysokiej masie cząsteczkowej zastosowano jako kontrolę niespecyficznych efektów, dzięki którym kwas hialuronowy może hamować przyłączanie GAS, niezależnie od interakcji z CD44. Takie efekty mogą obejmować modyfikację oddziaływań komórek bakteri-gospodarz, w których pośredniczą siły elektrostatyczne, lub zakłócanie przyłączania się bakterii przez lepkość roztworu polisacharydu. Odpowiednio, stosowaliśmy jako kontrolny kwas alginowy, inny polisacharyd o dużej masie cząsteczkowej, o podobnej lepkości do kwasu hialuronowego. Kwas alginowy nie wywierał żadnego działania, potwierdzając hipotezę, że przyleganie zależy od specyficznej interakcji między kapsułką kwasu hialuronowego GAS a CD44. Dodanie egzogennego kwasu hialuronowego do 45 minut po dodaniu GAS do keratynocytów nadal skutkowało ponad 90% zmniejszeniem przyczepności bakterii (P <0,03); jeśli dodawanie kwasu hialuronowego było opóźnione o 2 godziny, przyłączenie GAS zostało zmniejszone o 70. 80% (P <0,03) [hasła pokrewne: olx zakopane, jaskolcze ziele, klasterowe bóle głowy ]