stomatolog wyszków nfz

W przeciwieństwie do obniżenia ekspresji SEMA3F w wysoce przerzutowych komórkach nowotworowych, NRP1 i NRP2 ulegały ekspresji we wszystkich analizowanych liniach komórek nowotworowych, i nie było spójnej korelacji między potencjałem przerzutowym a ekspresją NRP w sparowanych liniach komórkowych. Rycina Linie komórkowe ludzkiej linii produkcyjnej obniżają SEMA3F. (A) Analiza Northern blot sparowanych ludzkich linii komórek rakowych o niskim (.) Versus wysokim (+) potencjale przerzutowym. Sparowane linie komórkowe obejmują komórki raka gruczołu krokowego PC3M (y) w porównaniu z PC3MLN4 (+), komórki raka pęcherza moczowego z komórek przejściowych 253J (a) w porównaniu z 253 JBV (+) i komórki czerniaka A375P (.) W porównaniu z SM (+). Przedstawiono analizę ekspresji mRNA dla SEMA3F, NRP1 i NRP2. (B) Analiza RT-PCR dla VEGFR w komórkach SM i komórkach HUVEC. GAPDH zastosowano jako kontrolę. (C) Analiza Western blot NRP1 i NRP2 w komórkach SM i różnych EC, w tym LEC, PAE NRP2, PAE NRP1, HUVEC i HPAEC. (D) Analiza Northern blot (górny panel) i analiza Western blot (dolny panel) znakowanej Myc ekspresji SEMA3F w różnych transfekowanych klonach in vitro. (E) Analiza Northern błot reprezentatywnych klonów nowotworowych in vivo. mRNA wyizolowano bezpośrednio z nowotworów hodowanych u myszy przez 4-5 tygodni i osuszono pod kątem ekspresji SEMA3F i NRP2. Aktynę stosuje się jako kontrolę obciążenia w komórkach A, D (u góry) i E. SM (nietransfekowanych) A375SM; Mo, pozornie transfekowane komórki A375SM zawierające tylko pusty wektor; H10, klon transfekowany plazmidem SEMA3F, który nie wyrażał wykrywalnego SEMA3F. Silnie przerzutowe komórki czerniaka A375SM (komórki SM) wybrano do dalszych badań, ponieważ eksprymowały one stosunkowo wysokie poziomy mRNA NRP2 (Figura 1, A i B) i białko (Figura 1C). NRP2 jest funkcjonalnym receptorem SEMA3F. Białko NRP1 nie było wykrywalne w komórkach SM (Figura 1C). Analiza RT-PCR wykazała, że komórki SM nie wykazują ekspresji VEGFR-1 ani VEGFR-2 (Figura 1B). Brak ekspresji VEGFR potwierdzono za pomocą analizy Western blot, jak również eksperymentów sieciowania 125I-VEGF (danych nie przedstawiono). Łącznie wyniki te wskazują, że NRP2 jest jedynym receptorem VEGF / semaforyny na komórkach SM. Z drugiej strony, komórki SM wydzielają VEGF-A (3 .g / ml, in vitro), jak zmierzono za pomocą testu ELISA. Aby bezpośrednio określić, czy SEMA3F może hamować przerzuty, gen SEMA3F został transfekowany do wysoce przerzutowych komórek czerniaka SM. Kolonie odporne na zeocynę zostały wybrane i rozwinięte. Stabilne klony A2, A3, B2, C3 i D1 wyrażały wysokie poziomy mRNA SEMA3F za pomocą analizy Northern blot (Figura 1D, góra) i wydzielały białko SEMA3F do pożywki (Figura 1D, dół). Untransfekowane komórki SM, komórki pozornie transfekowane zawierające tylko pusty wektor i stabilny klon transfekowany plazmidem SEMA3F (H10) nie eksprymowały wykrywalnego sygnału SEMA3F (Figura 1D, u góry) lub wydzielały białko SEMA3F (Figura 1D, dół) i, jako Konsekwencje były stosowane jako kontrole. Potencjał adhezji i migracji komórek eksprymujących SEMA3F analizowano in vitro. Adhezja komórek SM eksprymujących SEMA3F (SM / SEMA3F), klony C3 i E1, wysianych na fibronektynie (FN) została zmniejszona pięciokrotnie w porównaniu z próbką transfekowanych próbkami przy .g / ml FN (Figura 2A). Zmniejszenie adhezji do FN nie ograniczało się do linii komórkowych transfekowanych SEMA3F, ale występowało również w komórkach niezwiązanych. Rodzicielskie nie-klasyczne komórki czerniaka (A375P) eksprymowały obfity SEMA3F, podczas gdy wysoce przerzutowe komórki SM nie (Figura 1A). Adhezja komórek A375P do FN została zahamowana około pięciokrotnie w porównaniu z adhezją komórek SM i próbnych transfekowanych kontroli (Figura 2B). Figura 2SEMA3F hamuje adhezję i migrację, ale nie proliferację komórek nowotworowych. (A) Adhezja pozornie transfekowanych komórek SM (kwadraty) i 2 klonów SM / SEMA3F, C3 (okręgi) i E1 (trójkąty), do FN
[hasła pokrewne: kalorie banan, olx zakopane, kalarepa kalorie ]