www wolski pl

W celu analizy przerzutów myszy poddano autopsji po 8 dodatkowych tygodniach (łącznie 12 tygodni). Oczywiste przerzuty do płuc obserwowano łatwo przez zieloną fluorescencję (Figura 4J) u myszy z guzami kontrolnymi (6 z 6), ale nie u myszy z guzami wykazującymi ekspresję SEMA3F (0 z 3) (Tabela 1). U myszy kontrolnych, GRP-dodatnie mikroprzerzuty wykryto nawet w wewnętrznych tkankach płuc za pomocą IHC (Figura 4K), ale ponownie, nie wykryto żadnych przerzutów GFP-dodatnich o dowolnej wielkości u myszy SEMA3F. Przeprowadzono również eksperymentalne przerzuty poprzez wstrzyknięcie żyły ogonowej do krążenia (tabela 1). Po 12 tygodniach wykryto ponad 50 przerzutów na mysz (n = 10), gdy wstrzyknięto komórki SM lub pozornie transfekowane iv, zgodnie z wcześniejszymi doniesieniami dla tej linii komórkowej (30). Jednak tylko bardzo małe (<200 .m), nie-naczyniowe, zakapsułkowane przerzuty wykryto u z 10 myszy, którym wstrzyknięto dożylnie komórki SM / SEMA3F. Te wyniki sugerują, że SEMA3F może również hamować kolonizację płuc. Na podstawie tych wyczerpujących analiz stwierdzono, że SEMA3F jest nowym silnym inhibitorem zarówno przerzutów do węzłów chłonnych, jak i płuc. SEMA3F indukuje łagodny fenotyp nowotworu. Aby określić mechanizmy, dzięki którym SEMA3F hamuje przerzuty, badaliśmy guzy pierwotne z większą ostrożnością i stwierdziliśmy dramatyczne różnice w mikrośrodowisku guza nowotworów, którym brakowało, w porównaniu z nowotworami eksprymującymi, SEMA3F. Guzy z grupy kontrolnej SM wywoływały rozrost dużej keratynocytów w naskórku otaczającym guzy (Figura 5A, nawias). Grubość naskórka w normalnej skórze myszy wynosi zazwyczaj 2. 3 warstwy komórek, w przybliżeniu 20. M, podczas gdy naskórek pokrywający niektóre guzy SM zwiększono sześciokrotnie, w przybliżeniu 120. M (Figura 5A, nawias). Z drugiej strony nowotwory wydzielające SEMA3F indukowały bardzo niewielką proliferację keratynocytów w pokrywającym ją naskórku (Figura 5B, nawias). Inną charakterystyczną cechą morfologii nowotworu było to, że nowotwory wykazujące ekspresję SEMA3F były silnie otoczone dobrze zdefiniowanymi granicami nowotworowymi (Figura 5D, nawias) złożonymi z grubych warstw fibroblastów i macierzy kolagenu (Figura 5, F i H, nawiasy), podczas gdy guzy SM były niekapsułkowane (rysunek 5, C, E i G, nawiasy). Podsumowując, wyniki te sugerują, że wydzielanie SEMA3F przez nowotwory indukuje łagodny, bogaty w kolagen, zamknięty w kapsułce fenotyp nowotworu. Figura 5 Ekspresja SEEM3F zmienia mikrośrodowisko guza. (A i B) Barwienie H & E nowotworów z ekspresją SEMA3F i na jej powierzchni oraz bez niej. E, naskórek; D, skóra właściwa; T, guz. Pasek skali: 100 .m. Mysie komórki naskórka leżące nad guzami kontrolnymi były hiperplastyczne (A, nawias), podczas gdy naskórcze guzy z ekspresją SEMA3F pozostawały na prawie normalnej grubości (B, nawias). (C. H) Granice guza / podścieliska, z ekspresją SEMA3F i bez niej. (C i D) H & E. (E i F) IHC z zastosowaniem przeciwciał przeciwko fibroblastom (brązowy). (G i H) Barwienie barwnikiem Trichrome; kolagen jest barwiony na niebiesko. (C, E i G) Nowotwory bez SEMA3F miały niedorozwój granic i inwazyjne krawędzie prowadzące do guza. (D, F i H) Guzy eksprymujące SEMA3F były otoczone grubymi warstwami komórek zrębowych (nawiasami) tworzącymi wokół guza kapsułkę. Kapsułka była złożona głównie z fibroblastów (F), które osadzały matrycę kolagenu (H). Pasek skali: 100 .m. Ekspresja SEMA3F hamuje angiogenezę nowotworu. Przerzuty do komórek nowotworu czerniaka rozprzestrzeniają się z guza pierwotnego poprzez naczynia krwionośne i naczynia limfatyczne (31, 32). Wcześniej wykazaliśmy, że inny członek rodziny semaforyny, SEMA3A, hamował kiełkowanie śródbłonka w teście pierścienia aortalnego (21). Postawiliśmy hipotezę, że SEMA3F może również być inhibitorem angiogenezy. W celu analizy układu naczyniowego nowotworu, krioskrawki (8 .m) wybarwiono IHC przeciwciałem przeciwko mysiej CD31 (Figura 6, A (H) [podobne: kalafior wartości odżywcze, klasyfikacja icd 10, kminek właściwości ]