zrosty po operacji woreczka żółciowego

Dodatkowe analizy danych przeprowadzono przy użyciu pakietów oprogramowania SigmaPlot 2000 (SPSS Science, Chicago, Illinois, USA) i Origin 6.0 (Microcal Software Inc., Northampton, Massachusetts, USA). Prądy z całych komórek były filtrowane przy częstotliwości 2 kHz i uzyskiwane przy 5 kHz. Roztwór kąpielowy zawierał (w mM): 140 NaCl, 4.0 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 5 HEPES i 10 glukozy, pH 7,4, ~ 280 mosmol / kg. Roztwór pipetowy zawierał (w mM): 130 NaCl, 2,0 MgCl2, 5 HEPES i 5 EGTA, pH 7,4, a 270 mosmol / kg. Roztwór pipety rozcieńczono 7. 9% wodą destylowaną, aby zapobiec aktywacji aktywowanego spęcznieniem Cl. prądy. Pipety z krosownicą zostały wyciągnięte z grubościennego szkła borokrzemianowego (World Precision Instruments, Sarasota, Floryda, USA) za pomocą wielostopniowego ściągacza mikropaskowego P-87 Flaming-Brown (Sutter Instrument Co., San Rafael, Kalifornia, USA) i wypolerowanego ogniem za pomocą microforge (MF-830; Narishige Co., Tokio, Japonia). Rezystancja pipety wynosiła około 4 M. za pomocą NaCl w pipecie i roztworach kąpieli. Oporność serii była zawsze kompensowana co najmniej w 85%. Jako elektrodę odniesienia zastosowano mostek agarowy o składzie zbliżonym do roztworu kąpieli. Wszystkie doświadczenia przeprowadzono w temperaturze pokojowej. Dla początkowych zapisów prądy wywołano serią 250-ms impulsów testowych z potencjału utrzymywania 0 mV w zakresie od ~ 160 do +120 mV w krokach 20-mV. Zależność napięciową aktywacji dla kanałów cClC-1 uzyskano jak opisano wcześniej (13). W skrócie, prądy chwilowe mierzono przy ~ 120 mV po impulsach 1400 ms (. 160 do +120 mV, kroki 20 mV, 15 sekund przy 0 mV między przeciągnięciami) i podzielone przez największą wartość prądu. Znormalizowane dane zostały następnie wykreślone w porównaniu do potencjałów prepulsu. Ten wykres daje względne otwarte prawdopodobieństwo (Po) kanałów cClC-1 na końcu potencjału prepulsu. Używając oprogramowania Origin 6.0, dane uzyskane w ten sposób z każdej komórki zostały dopasowane do równania Boltzmanna: Po = (Po, min. Po, max) / {1 + exp [(V. V1 / 2) × kV]} + Po, max, gdzie Po jest względne otwarte prawdopodobieństwo, Po, min jest minimalne Po, Po, maksimum jest maksymalne Po, kV jest współczynnikiem nachylenia, a V1 / 2 jest napięciem dla połowy maksymalnej aktywacji (w mV). Wyniki Projekt rybozymu z trans-splicingiem. Zmodyfikowaliśmy intronowy ryozym Tetrahymena grupy I w celu przeprowadzenia reakcji trans-splicingu w celu przywrócenia sekwencji cClC-1 typu dzikiego. Ważnym wymaganiem sekwencji dla trans-splicingu pośredniczonego przez rybozym jest utworzenie pary zasad nie-Watsona-Cricka G: U między rybozymem a docelowym RNA (8). Początkowo używaliśmy techniki mapowania RNA, aby określić, które urydyny w docelowym transkrypcie (zmutowany mRNA T268M) są dostępne dla rybozymu. Dostępne miejsca w mRNA T268M określono przez inkubację losowej biblioteki rybozymów IGS z transkrybowanym in vitro mRNA T268M w bezkomórkowej reakcji trans-splicingu. Siedem dostępnych uridyny zidentyfikowano przez sekwencjonowanie tych produktów reakcji, a urydyny w pozycji nukleotydowej 712 (U712) wybrano jako cel, ponieważ był to 5. miejsce najbliżej T268M (nukleotyd 803, rysunek 1). Rybozymu nakierowany na U712 z IGS o sześciu nukleotydach i 3. ekson odpowiadający nukleotydom 713. 4,717 cClC-1 został skonstruowany, a aktywność trans-splicingu została potwierdzona w systemie bezkomórkowym (dane nie pokazane). Rycina Skrypt do naprawy zmutowanego mRNA cClC-1 za pośrednictwem rybozymu. Rybozym (czerwony) zawiera IGS, którego pary zasad mają miejsce komplementarne na docelowym mRNA (czarnym) powyżej mutacji T268M (×). Rybozym katalizuje cięcie mRNA T268M, a następnie ligację pozostałej docelowej sekwencji i dzikiego typu 3. sekwencja eksonów (niebieski), przywracając w ten sposób poprawną ramkę odczytu translacji cClC-1
[więcej w: kalorie banan, kardiowersja elektryczna, inteligencja emocjonalna pdf ]